Dalam Penelitian yang menggunakan subyek Hewan Coba setidaknya harus mematuhi prinsip 3R + 1R sebagai berikut:
1. Replacement
Yaitu mengganti subyek dengan yang lebih efektif untuk mempertajam penelitian, sebaiknya sesuaikan dengan literatur atau penelitian yang terdahulu jika ada.
2. Reduce
Yaitu mengurangi jumlah subyek jika memungkinkan, supaya lebih efektif serta menghemat waktu dan biaya.
3. Refinement
Yaitu jika tetap menggunakan hewan coba maka, gunakanlah metode yang paling manusiawi dengan meminimalkan atau bahkan mungkin menghilangkan gangguan yang mungkin akan di alami subyek tersebut.
4. Responsibility
Sebagai peneliti harus bertanggungjawab terhadap segala hal yang terjadi pada subyek hewan coba.
Selain itu subyek hewan coba juga sebaiknya mematuhi 5 prinsip Animal Welfare:
- (Freedom from hunger and thirst). Hal ini dilakukan dengan menyediakan kemudahan akses air minum dan penyediaan pakan dalam jumlah yang cukup untuk memenuhi kebutuhan nutrisi. Apabila hal ini tidak dapat dipenuhi akan berakibat pada timbulnya penyakit dan penderitaan Subyek.
- (Freedom from discomfort). Prinsip ini dipenuhi dengan penyiapan kandang dan pola pemeliharaan yang baik sesuai SOP. Apabila kondisi ini tidak mampu disediakan akan menyebabkan penderitaan dan rasa sakit yang berdampak pada fisik dan psikologis hewan
- (Freedom from pain, injury and disease). Upaya yang diterapkan terkait dengan pencegahan penyakit, penanganan atau treatment yang cepat dan tepat. Apabila kebebasan ini tidak mampu dipenuhi maka akan memicu penyakit yang berakibat pada kematian hewan dan ancaman transmisi (penularan) penyakit antar hewan maupun manusia.
- (Freedom to express normal behaviour). Kebebasan ini dipenuhi dengan penyediaan ruang dan fasilitas yang cukup untuk pemeliharaan subyek, penataan subyek berdasarkan fisiologis, fisik dan reproduksi.
- (Freedom from fear and distress). Kondisi ini dipenuhi dengan memberikan perlakuan yang dapat mencegah rasa takut dan penderitaan subyek.